原位雜交儀良好的溫度控制功能，確保FISH操作更具穩(wěn)定性

熒光原位雜交技術(shù)是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示核酸序列位置的方法。該技術(shù)問世與70年代中期左右，其曾多于與染色體異常的研究，近年來隨著FISH探針種類的不斷增多，使得該技術(shù)逐步應(yīng)用于各種領(lǐng)域。該技術(shù)具有快速，安全，靈敏度高以及探針可長期保存等特點，目前已廣泛應(yīng)用于細胞遺傳學(xué)，腫瘤生物學(xué)，基因定位，基因作圖，基因擴增及分子診斷等領(lǐng)域。

FISH，熒光原位雜交。目前廣泛應(yīng)用于：

（一）基因（或DNA片段）染色體定位和基因圖譜繪制

（二）發(fā)現(xiàn)染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常，廣泛應(yīng)用于快速產(chǎn)前診斷

（三）血液腫瘤學(xué)

（四）實體腫瘤學(xué)

對于FISH操作來說，那些因素比較重要？

在FISH中很重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強度，因此探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬滅劑封片且避光保存；各種試劑pH也要達到要求，這也直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。

如何確保FISH操作中的溫度？

較佳的措施是使用一些FISH的專用儀器進行操作，比如佰泉的原位雜交儀。如果是手工操作，首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控能力的檢查，如水浴鍋、孵箱，對其中不符合要求的要進行更換（疾病診斷中的探針要求溫控精度在0.5度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對于在冬季進行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預(yù)熱以達到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。同時檢測的樣本盡量不能超過4塊。操作中的行動一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不多（10ul），因此事先沒有預(yù)熱的蓋玻片會使得雜交液的溫度急劇下降嚴重地影響了探針和目標DNA的雜交效率。因此對上述小部件的要進行預(yù)熱處理，不然會影響FISH的雜交效果。

FISH 技術(shù)作為連接分子生物學(xué)與細胞生物學(xué)的橋梁地位已為世人所公認。盡管目前FISH技術(shù)無法達到完全的雜交，特別是在應(yīng)用較短cDNA探針時存在雜交效率明顯下降的問題，但隨著各種新型分子探針以及精度更高的光學(xué)顯微鏡和功能強大的計算機分析系統(tǒng)的不斷問世，上述問題將會逐步得到解決，該技術(shù)的作用正變得日益重要，應(yīng)用領(lǐng)域也得以不斷擴展。FISH技術(shù)在泌尿系統(tǒng)腫瘤研究領(lǐng)域的巨大潛力與光明前景將帶領(lǐng)我們進入全新時代。