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FISH操作靈活,不需要對(duì)正在分裂的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),因而能夠用來(lái)檢測(cè)基因或染色體是否異常,可用于遺傳咨詢、DNA特定功能等研究。目前熒光原位雜交技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)、基因組進(jìn)化研究、環(huán)境菌樣分析等眾多領(lǐng)域。
熒光原位雜交技術(shù) (fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是一種細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)。該技術(shù)通過(guò)熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記的原位雜交方法,使熒光探針與染色體結(jié)合,并且結(jié)合部分的序列顯示出高度的互補(bǔ)性。
熒光原位雜交儀的探針有DNA探針和RNA探針,可對(duì)動(dòng)物組織和植物組織中核酸進(jìn)行檢測(cè),特異性較高。
雜交所用的探針大致可以分為三類:(1)染色體特異重復(fù)序列探針;(2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針;(3)原位雜交儀特異性位置探針,由一個(gè)或幾個(gè)克隆序列組成。探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。
間接標(biāo)記是采用生物系標(biāo)記的dUTP經(jīng)過(guò)缺口平移法進(jìn)行標(biāo)記;而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸蔌磷酸戊糖骨架共價(jià)結(jié)合,或在缺口平移法標(biāo)記探針時(shí)將熒光素核苷三磷酸摻入。