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發(fā)布時間:2024-10-02 00:50:00邢臺定制TBE廠家
動態(tài)濁度法是指通過檢測反應(yīng)混合物的濁度到達(dá)預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間,或是檢測濁度增加速度來檢測內(nèi)毒素的方法。在適宜的條件下(溫度,pH值及無干擾物質(zhì)),細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子,引起一系列酶促反應(yīng),使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。隨著凝膠的形成,反應(yīng)液的吸光度(OD值,濁度)增加,OD值增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)。換言之,OD值上升某一預(yù)設(shè)限值(啟動OD)所需要的時間(定義為啟動時間)與內(nèi)毒素濃度成負(fù)相關(guān),啟動時間的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)成線性關(guān)系,據(jù)此,熒光原位雜交儀可以定量檢測供試品的內(nèi)毒素濃度??蛻粢部梢砸笪覀兲峁┌攵糠椒?凝膠法進(jìn)行樣品內(nèi)毒素限度水平檢測。
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蛋白同位素標(biāo)記是經(jīng)典的一種蛋白示蹤和蛋白組學(xué)定量技術(shù),與體外標(biāo)記技術(shù)相比,同位素標(biāo)記技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記。原理:用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素 (重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸,細(xì)胞經(jīng)5-6個倍增周期后,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸全部摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合,經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,根據(jù)一級質(zhì)譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對定量。
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熒光原位雜交儀是利用熒光探針與染色體結(jié)合,并且結(jié)合部分的序列顯示出高度的互補(bǔ)性。熒光探針與染色體結(jié)合的部分通常使用熒光顯微鏡觀察。FISH為研究人員提供了一種新的來可視化或繪制單個細(xì)胞中的遺傳物質(zhì),包括特定基因或基因的一部分的方法。它是了解各種染色體異常和其他基因突變的重要工具。與用于染色體研究的大多數(shù)其他技術(shù)不同,F(xiàn)ISH不需要對活躍分裂的細(xì)胞進(jìn)行,這使其成為一種非常通用的程序。
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熒光原位雜交儀的探針有DNA探針和RNA探針,可對動物組織和植物組織中核酸進(jìn)行檢測,特異性較高。雜交所用的探針大致可以分為三類:(1)染色體特異重復(fù)序列探針;(2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針;(3)原位雜交儀特異性位置探針,由一個或幾個克隆序列組成。探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物系標(biāo)記的dUTP經(jīng)過缺口平移法進(jìn)行標(biāo)記;而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸蔌磷酸戊糖骨架共價結(jié)合,或在缺口平移法標(biāo)記探針時將熒光素核苷三磷酸摻入。
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全自動原位雜交儀中的噬菌體展示技術(shù)為全人源治療性抗體的研發(fā)提供了基礎(chǔ),拓展了定向進(jìn)化技術(shù)在抗體多肽改造篩選方面的應(yīng)用,對抗體藥物的研制具有重要意義。熒光原位雜交儀噬菌體展示系統(tǒng):M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng),通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá),使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫。