綿陽(yáng)專業(yè)雜交儀批發(fā)
發(fā)布時(shí)間:2024-03-27 00:55:09綿陽(yáng)專業(yè)雜交儀批發(fā)
蛋白同位素標(biāo)記是經(jīng)典的一種蛋白示蹤和蛋白組學(xué)定量技術(shù),與體外標(biāo)記技術(shù)相比,同位素標(biāo)記技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記。原理:用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素 (重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸,細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸全部摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合,經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。
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通過各種方式獲得目標(biāo)抗體后,在某些情況下,為了方便對(duì)抗原進(jìn)行觀察和檢測(cè),通常會(huì)選擇利用一些易測(cè)定又具有高度敏感性的物質(zhì)作為標(biāo)記物標(biāo)記抗體,通過檢測(cè)這些標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)而產(chǎn)生的顏色變化、光譜變化等來顯示或定量反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。利用抗體的組成物氨基酸的特殊理化性質(zhì),在特定的條件下使抗體與標(biāo)記物結(jié)合,形成抗體標(biāo)記物??贵w標(biāo)記主要用于抗原的定位分析,能通過標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)提高檢測(cè)靈敏度,是一種快速價(jià)廉的定量測(cè)定方法。
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動(dòng)態(tài)濁度法是指通過檢測(cè)反應(yīng)混合物的濁度到達(dá)預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時(shí)間,或是檢測(cè)濁度增加速度來檢測(cè)內(nèi)毒素的方法。在適宜的條件下(溫度,pH值及無(wú)干擾物質(zhì)),細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子,引起一系列酶促反應(yīng),使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。隨著凝膠的形成,反應(yīng)液的吸光度(OD值,濁度)增加,OD值增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)。換言之,OD值上升某一預(yù)設(shè)限值(啟動(dòng)OD)所需要的時(shí)間(定義為啟動(dòng)時(shí)間)與內(nèi)毒素濃度成負(fù)相關(guān),啟動(dòng)時(shí)間的對(duì)數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系,據(jù)此,熒光原位雜交儀可以定量檢測(cè)供試品的內(nèi)毒素濃度??蛻粢部梢砸笪覀兲峁┌攵糠椒?凝膠法進(jìn)行樣品內(nèi)毒素限度水平檢測(cè)。